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荧光显微镜的光学系统必须完成两个主要功能

太阳集团娱乐官方网站 2019-01-24 09:36:42

荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸取、运输、化学物质的分布及定位等。 细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。但是荧光显微镜的光学系统必须完成两个主要功能:

荧光显微镜的光学系统必须完成两个主要功能

(1)要有效的激发试样中荧光反应物,使用的发射波长接近它的吸取峰:

(2)必须尽可能呢个多的收集发出的荧光,以便使显微镜内可见度zui合适。

荧光光学系统的成象质量主要取决于象的衬度和象的亮度,象的衬度是由样品中激发出的荧光于背景上观察到的光之比决定的。背景光包括透过阻挡激发光的滤色片的杂散激发光,样品组织成分的自发荧光和光学系统的自发荧光和杂散光,荧光显微术中尽全力要解决的是一方面获得zui佳的象衬度,同时又维持象有足够亮度,这两者往往是矛盾的。例如用极窄波带滤色片激发时仅利用了极少的光能,背景暗了但荧光亮度也弱了。在应用时,只能兼顾,合理的权衡以决定取舍。

荧光显微镜光学系统需要优先考虑的是:

1. 光学系统造成的材料应选用在激发光波内无荧光材料,不但指光学系统玻璃也包括胶合制造中的胶合剂、切片、盖玻片和浸液以及密封剂。若有自发荧光时,被单增加背景光,有时还会混扰观察荧光图象。

2. 光学系统的参数选择中,应将获得光能作为*考虑因素。

如照明系统中集光镜应选用的包容角;采用科勒照明并使灯丝或弧光象充满入瞳.....以希望获得高效率的均匀照明。

荧光显微镜如收集荧光成像的物镜,因为象面照度与数值孔径成正比,为此作为荧光用物镜应有较大的值。

如双目镜筒作为荧光用时应在可见光谱段有较高的透过率,采用镀膜技术可大大地减少光能的损失,它可比一般双目镜筒透过率提高一倍,这对弱荧光物质观察是必需的。

3. 作为荧光光学系统各组成部件的光谱特性也是至关重要的,特别紫外光要通过的部件如照明系统,聚光镜以及物镜,就要关注紫光区的透射系数。如聚光镜材质要选用透紫外线制造。如照明系统中反光镜转折光路时,表面镀铝比镀银好,因为铝的反射率在90%以上,而银仅达70%。

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